DNáza I, bez Rnáz

Řada metod molekulární biologie vyžaduje štěpení DNA pomocí deoxyribonukleázy I (DNáza I). Tento enzym štěpí jednovláknové a dvouvláknové řetězce DNA za vzniku mono- a oligonukleotidů.

Kat. č. Název Balení Cena
D061 DNáza I, bez Rnáz 5000 U 1 790,00 Kč

Popis produktu

Řada metod molekulární biologie vyžaduje štěpení DNA pomocí deoxyribonukleázy I (DNáza I). Tento enzym štěpí jednovláknové a dvouvláknové řetězce DNA za vzniku mono- a oligonukleotidů. DNáza I v přítomnosti Mg2+ hydrolyzuje každý z řetězců dvouvláknové DNA nezávisle a náhodně. Jako příklad použití lze uvést odstranění stopových množství DNA z preparátů RNA (procedury RT-PCR a tzv. Differential Display Library), DNázový "footprinting", mapování oblastí citlivých k DNáze, konstrukce plasmidů, radioaktivní značení pomocí nick translace. Běžně dodávané komerční preparáty DNázy, i ty u kterých je vyznačeno, že neobsahují RNázovou aktivitu, jsou pro tyto experimenty nepoužitelné, neboť stopová množství RNázy se negativně projeví při jejich aplikaci.

Preparát DNáza I, bez RNáz  byl připraven z bovinního pankreatu tak, že neobsahuje ani stopová množství RNázy a lze jej bezprostředně využít pro molekulárně-biologické techniky.

Technické údaje

Koncentrace

  • DNáza I, bez RNáz je dodávána v koncentraci 10 000 U/ml.

Balení

  • 1 zkumavka DNázy I, bez RNáz, 5 000 U/0,5 ml.
  • 1 zkumavka 5x koncentrovaného reakčního pufru, 1 ml.

Definice jednotky

  • Jedna jednotka je definována jako množství enzymu, které kompletně degraduje 1 µg DNA za 10 min při 37oC ve 20 µl reakčního pufru o složení: 20 mM Tris-HCl, pH 7.6, 20 mM NaCl, 12 mM MgCl2 a 4 mM CaCl2.

Skladování

  • Skladovat při teplotě -20 ± 5oC. Materiál snáší opakované rozmrazování.

Složení

  • Reakční pufr (5x): 100 mM Tris-HCl (pH 7.6 při 20oC), 100 mM NaCl, 60 mM MgCl2, 20 mM CaCl2 (označen 5x DNáza I react pufr).
  • Skladovací pufr: 10 mM Tris-HCl (pH 7,6 při 20oC), 10 mM NaCl, 6 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 50% (vol/vol) glycerol.

Kontrola kvality

  • Za podmínek kdy Dnáza I kompletně degraduje DNA, nemá tento enzym efekt na průběh RT-PCR a na elektroforetickou intaktnost RNA.