• DNA polymerázy a pufry
  • Q-Taq DNA polymeráza
  • Taq DNA polymeráza
  • Taq DNA polymeráza Unis
  • Taq-Purple DNA polymeráza
  • Taq DNA polymeráza 1.1
  • LA DNA Polymerases Mix
  • 10x koncentrovaný PCR Blue Buffer
  • Přehled produktů
• Hot Start DNA polymerázy
  • Combi Taq DNA polymeráza
  • Aptamer Taq DNA polymeráza
  • Blood Taq DNA polymeráza
  • Přehled produktů
• DNA-free PCR Master Mixy
  • TP HS DNA-free 2x Master Mix
  • TP HS DNA-free 2x SYBR Master Mix
  • Přehled produktů
• PCR Master Mixy
  • PPP Master Mix
  • PPP Master Mix bez MgCl2
  • Plain PP Master Mix
  • TP 2x Master Mix
  • PCR START 2x Master Mix kit
  • Přehled produktů
• Hot Start PCR Master Mixy
  • Aptamer Hot Start Master Mix
  • Combi PPP Master Mix
  • Plain Combi PP Master Mix
  • LA Hot Start Master Mix
  • Přehled produktů
• Real-time PCR (qPCR) Master Mixy
  • qPCR 2x SYBR Master Mix
  • qPCR 2x SYTO-9 Master Mix
  • TP SYBR 2x Master Mix
  • qPCR 2x Master Mix
  • qPCR 2x Blue Master Mix
  • LA Hot Start Plain Master Mix
  • qPCR 2x Blue Master Mix + ROX
  • ROX Reference Dye
  • qPCR START 2x Master Mix kit
  • Přehled produktů
• Další enzymy
  • M-MLV Reverzní transkriptáza
  • DNáza I, bez RNáz
  • RNáza bez DNáz
  • Přehled produktů
• Izolace DNA a RNA
  • Column DNA Lego Kit
  • DEP-25 DNA Extraction Kit
  • PCR Genotyping Kit
  • RNA Blue
  • DNA Lego kit
  • RNA CT Protector
  • Carrier-iRNA (dříve RNA nosič R057)
  • Carrier-ACRYL
  • Carrier-GLY
  • Přehled produktů
• DNA markery
  • Economy DNA marker 100–500
  • Economy DNA marker 100–500 coloured
  • DNA marker 155-970
  • DNA marker 155-970 coloured
  • DNA marker 200-1500
  • DNA marker 200-1500 coloured
  • DNA marker 200-1500+ (200-700 po 50pb)
  • DNA marker 200-1500+ coloured (200-700 po 50pb)
  • Přehled produktů
• Další materiál pro PCR
  • PCR dNTP mix
  • PCR enhancer
  • PCR H2O
  • PCR Ultra H2O
  • PCR olej
  • PCR Ethanol, 75%
  • PCR Ethanol, 80%
  • PCR Ethanol, 96%
  • PCR Sodium acetate buffer solution, 3 M, pH 5.2
  • Přehled produktů
• Materiál pro elektroforézu
  • PCR agaróza
  • PCR ethidium bromid
  • PCR vkládací pufr
  • PCR vkládací pufr Red load
  • PCR vkládací pufr Yellow load
  • PCR vkládací pufr Edge
  • Přehled produktů

Úvod

Kvantitativní PCR (qPCR; z anglického „quantitative PCR“), nazývaná také „real-time“ PCR, je metoda vhodná pro stanovení relativního množství specifické DNA v reakční směsi. V kombinaci s metodou reverzní transkripce, umožňující přepis RNA na cDNA, se jedná o základní nástroj pro studium genové exprese konkrétních genů v buňkách.

Předpokladem qPCR analýzy je  dostupnost termálních cyklerů, které jsou vybaveny zařízením pro monitorování fluorescence v jednotlivých cyklech qPCR. Dalším požadavkem je dostupnost reakčních směsí vhodných pro amplifikaci DNA fragmentů v přítomnosti fluorescenčního DNA barviva nebo sondy, které umožňují kvantifikaci DNA. Firma Top-Bio nabízí několik optimalizovaných reakčních směsí, označovaných Master Mixy, které jsou určené pro amplifikaci DNA fragmentů metodou qPCR.

Důležitou komponentou Master Mixů je monoklonální protilátka anti-Taq, která inaktivuje enzymatickou aktivitu Taq DNA polymerázy. V prvním cyklu PCR, po dosažení temploty 94^oC, dochází k irreverzibilní denaturací anti-Taq protilátky a odblokování jejího inhibičního efektu. Tím způsobem ("hot start") je výrazně snížena tvorba nespecifických produktů. Master Mixy obsahují všechny komponenty 2x koncentrované (pufr, nukleotidy, enzym, protilátka) a před vlastní qPCR stačí přidat DNA templát, primery, H₂O a případně fluorescenční sondu. Master Mixy Top-Bio provenience mají různé využití.

qPCR Master Mixy s fluorescenčním DNA barvivem:

qPCR 2x SYBR Master Mix

• Základní produkt obsahující fluorescenční DNA barvivo SYBR Green I, které se interkaluje mezi báze dvouvláknové DNA. Je vhodný pro většinu amplifikací detekující relativní množství studované DNA bez požadavku na specifické sondy.

qPCR 2x SYTO-9 Master Mix

• Tento produkt obsahuje fluorescenční DNA barvivo SYTO-9, které umožňuje amplifikaci delších fragmentů DNA (až do velikosti 1kbp) a je vhodné pro HRM („high resolution melting“) analýzu amplifikovaných úseků DNA.

TP SYBR 2x Master Mix

•  Je určený pro univerzální analýzu vzorků pomocí metody qPCR s kvantifikací amplifikovaných DNA fragmentů pomocí fluorescenčního DNA barviva SYBR Green I. Vychází z nedávného nálezu, že přidání Trehalózy a 1,2-Propandiolu (zkráceně TP) do reakční směsi může podstatně zvýšit účinnost PCR a napomoci při amplifikaci obtížně analyzovatelných vzorků, včetně DNA z neseparované krve, se zvýšeným obsahem GC a vzorků, které obsahují inhibitory PCR (Horáková a spol., BMC Biotechnology, 11:41, 2011; Free PMC article).

qPCR Master Mixy:

qPCR 2x Master Mix

• Tento produkt je svým složením shodný s qPCR 2x SYBR Master Mix, avšak neobsahuje fluorescenční barvivo. Proto je vhodný na metody využívající alternativní způsoby detekce amplifikovaných fragmentů DNA, jako například detekční sondy typu TaqMan, Molecular beacons, Fret a další.

qPCR 2x Blue Master Mix

• Tento produkt stejně jako qPCR 2x Master Mix neobsahuje fluorescenční barvivo a je proto vhodný pro detekci PCR produktů pomocí specifických sond. Rozdílné složení reakčního pufru obsahující síran amonný může být účinnější pro průběh některých qPCR.

La Hot Start Plain Master Mix

• Obsahuje unikátní směs dvou DNA polymeráz Kombinace těchto dvou polymeráz vede k výraznému snížení chyb při zachování vysoké robustnosti (LA = Long and Accurate PCR).