• DNA polymerázy a pufry
  • Q-Taq DNA polymeráza
  • Taq DNA polymeráza
  • Taq DNA polymeráza Unis
  • Taq-Purple DNA polymeráza
  • Taq DNA polymeráza 1.1
  • LA DNA Polymerases Mix
  • 10x koncentrovaný PCR Blue Buffer
  • Přehled produktů
• Hot Start DNA polymerázy
  • Blood Taq DNA polymeráza
  • Combi Taq DNA polymeráza
  • Aptamer Taq DNA polymeráza
  • Přehled produktů
• DNA-free PCR Master Mixy
  • TP DNA-free 2x Master Mix
  • TP DNA-free 2x SYBR Master Mix
  • TP HS DNA-free 2x Master Mix
  • TP HS DNA-free 2x SYBR Master Mix
  • Přehled produktů
• PCR Master Mixy
  • PPP Master Mix
  • PPP Master Mix bez MgCl2
  • Plain PP Master Mix
  • TP 2x Master Mix
  • Přehled produktů
• Hot Start PCR Master Mixy
  • Aptamer Hot Start Master Mix
  • Combi PPP Master Mix
  • Plain Combi PP Master Mix
  • LA Hot Start Master Mix
  • Přehled produktů
• Real-time PCR (qPCR) Master Mixy
  • TP SYBR 2x Master Mix
  • qPCR 2x SYBR Master Mix
  • qPCR 2x SYTO-9 Master Mix
  • qPCR 2x Master Mix
  • qPCR 2x Blue Master Mix
  • LA Hot Start Plain Master Mix
  • qPCR 2x Blue Master Mix + ROX
  • ROX Reference Dye
  • Přehled produktů
• Další enzymy
  • M-MLV Reverzní transkriptáza
  • DNáza I, bez RNáz
  • RNáza bez DNáz
  • Přehled produktů
• Izolace DNA a RNA
  • Column DNA Lego Kit
  • DEP-25 DNA Extraction Kit
  • PCR Genotyping Kit
  • RNA Blue
  • DNA Lego kit
  • RNA CT Protector
  • Carrier-iRNA
  • Carrier-ACRYL
  • Carrier-GLY
  • Přehled produktů
• DNA markery
  • Economy DNA marker 100–500
  • Economy DNA marker 100–500 coloured
  • DNA marker 155-970
  • DNA marker 155-970 coloured
  • DNA marker 200-1500
  • DNA marker 200-1500 coloured
  • DNA marker 200-1500+ (200-700 po 50pb)
  • DNA marker 200-1500+ coloured (200-700 po 50pb)
  • Přehled produktů
• Další materiál pro PCR
  • PCR dNTP mix
  • PCR enhancer
  • PCR H2O
  • PCR Ultra H2O
  • PCR olej
  • PCR Ethanol, 75%
  • PCR Ethanol, 96%
  • PCR Tris-EDTA buffer solution, pH 8.0, 100x
  • PCR Sodium acetate buffer solution, 3 M, pH 5.2
  • Přehled produktů
• Materiál pro elektroforézu
  • PCR agaróza
  • PCR ethidium bromid
  • PCR vkládací pufr
  • PCR vkládací pufr Red load
  • PCR vkládací pufr Yellow load
  • PCR vkládací pufr Edge
  • Přehled produktů

qPCR 2x SYBR Master Mix

Popis produktu

qPCR 2x SYBR Master Mix je určený pro analýzu vzorků pomocí metody qPCR s kvantifikací amplifikovaných DNA fragmentů pomocí fluorescenčního DNA barviva SYBR Green I.

SYBR Green I

• Produkt obsahuje interkalační DNA barvivo SYBR Green I, které se po navázání na dvouvláknovou DNA stává silně fluorescenční s maximální excitací 497 nm (modré světlo) a emisí 520 nm (zelené světlo). Protože fluorescence SYBR Green I nenavázaného na DNA je velmi nízká, je nárůst fluorescence vzorku na konci elongační fáze PCR reakce přímo úměrný množství amplifikovaných fragmentů.

Rychlá příprava (2x koncentrovaný)

• Produkt obsahuje všechny konstantní komponenty pro qPCR 2x koncentrované (optimalizovaný reakční pufr, nukleotidy, Taq DNA polymerázu, protilátku anti-Taq, SYBR Green I). To umožňuje rychlou přípravu reakční směsi bez nutnosti rozmrazování a přesného dávkování jednotlivých komponent. Stačí dodat primery, templátovou DNA a eventuálně doplnit H₂O (součást balení).

Hot Start

• Produkt obsahuje monoklonální protilátku anti-Taq, která se váže na Taq DNA polymerázu a tím blokuje její enzymatickou aktivitu a zamezuje amplifikaci nespecifických DNA fragmentů. Protilátka je teplotně inaktivována při prvním denaturačním cyklu qPCR.

Citlivá detekce

• Tento produkt je optimalizován pro citlivou a přesnou detekci DNA fragmentů amplifikovaných při qPCR z genomové DNA nebo z cDNA, získané metodou reverzní transkripce.

Příklady využití

 

Obr. 1. Celková RNA z buněk Jurkat byla metodou reverzní transkripce převedena na cDNA s využitím RNA Blue RT-PCR kitu (kat. č. R001). Získaná cDNA byla buď neředěna nebo reděna 5x, 25x, 125x, 625x, 3125x a poté byly přidány primery specifické pro GAPDH (glyceraldehyd 3-fosfát dehydrogenáza) o výsledné koncentraci 1 µM. Získané vzorky byly smíchány 1:1 s qPCR 2x SYBR Master Mixem a analyzovány v hexaplikátech metodou qPCR na přístroji Roche LightCycler® 480 System. Grafy znázorňují intenzitu fluorescence v závislosti na cyklu PCR (A) a analýzu MTP ("melting point temperature") výsledných produktů pro každé ředění (B).

Obr. 2. qPCR 2x SYBR Master Mix umožňuje spolehlivou detekci různých genových produktů. Celková RNA z buněk Jurkat byla metodou reverzní transkripce převedena na cDNA s využitím RNA Blue RT-PCR kitu (kat. č. R001). Jako kontrola (ctrl) sloužil vzorek, ke kterému nebyla přidána reverzní transkriptáza. K získaným vzorkům byly dodány primery specifické pro GAPDH (glyceraldehyd 3-fosfát dehydrogenáza), TUBB (ß-tubulin), PGK1 (fosfoglycerát kináza 1), RPLPO (large ribosomal protein) nebo ACTB (ß-aktin) o výsledné koncentraci 1 µM. Následně byly vzorky smíchány 1:1 s qPCR 2x Master Mixema nalyzovány v triplikátech metodou qPCR na přístroji Roche LightCycler® 480 System. Graf znázorňuje intenzitu fluorescencev závislosti na cyklu PCR pro jednotlivé páry primerů.

Technické údaje

Komponenty základního balení

• 1 zkumavka s 0,5 ml qPCR 2x SYBR Master Mixu (na 40 reakcí po 25 µl).
• 1 zkumavka 1,5 ml PCR H₂O.

Skladování

• Skladovat při teplotě -20°C ± 5°C. Materiál snáší opakované rozmrazování.

Složení 

• Dodává se 2x koncentrovaný: 20 mM Tris-HCl, pH 8,8 (25°C), 100mM KCl, 0,2% Triton X-100, 3 mM MgCl₂, 400 µM dATP, 400 µM dCTP, 400 µM dGTP, 400 µM dTTP, Taq DNA polymeráza (50 U/ml), monoklonální protilátka anti-Taq, SYBR Green I, stabilizátory a aditiva.

Kontrola kvality  

• Každá šarže qPCR 2x SYBR Master Mixu je testována na amplifikaci genu o jedné kopii v genomové DNA.

Soubory ke stažení

Produktový list Product information Bezpečnostní list