PPP Master Mix bez MgCl2

Popis produktu

Jedná se o doplňkový produkt z řady PPP Master Mixů. Oproti klasickému PPP Master Mixu (kat. č. P124-P126) není MgCl₂ přidán přímo do Master Mixu, ale je dodáván odděleně. Pokud je požadovaný produkt PCR reakce obtížně amplifikovatelný, je možné optimalizovat koncentraci MgCl₂ pro získání co nejlepších podmínek pro průběh PCR.

Protože tento produkt již obsahuje Taq DNA polymerázu a optimalizovaný reakční pufr ve dvojnásobné koncentraci, stačí pouze doplnit MgCl₂ na požadovanou koncentraci, dodat primery, DNA templát a vodu a zahájit PCR reakci. Další obsažená aditiva a barvivo umožňují posléze okamžité nanesení vzorku na gel bez nutnosti přidávat vkládací pufr.

Rychlá příprava (2x koncentrovaný)

• Kit obsahuje 2x koncentrované komponenty nezbytné pro průběh PCR reakce. To umožňuje rychlou přípravu reakční směsi bez nutnosti rozmrazování jednotlivých komponent. Stačí dodat primery, templátovou DNA, doplnit MgCl₂ na požadovanou koncentraci a H₂O (oboje je dodáváno jako součást balení).
• Umožňuje snadné určení optimální koncentrace MgCl₂ pro ideální průběh PCR.

Okamžité nanášení na gel

• K amplifikovaným vzorkům není potřeba přidávat vkládací pufr. Kit obsahuje barvivo a aditiva, která umožňují nanesení vzorku na gel a elektroforézu ihned po ukončení PCR reakce.
• Barvivo migruje v čele gelu a neinterferuje tak s kvantifikovatelností PCR produktů. Barvivo ani aditiva nemají vliv na průběh amplifikace.

Optimalizovaný reakční pufr

• Obsahuje reakční pufr, který zvyšuje účinnost i specificitu PCR.
• Obsahuje stabilizátory, které umožňují krátkodobé skladování při 4°C.

Technické údaje

Komponenty základního balení

• 1 zkumavka s 0,5 ml PPP Master mixu bez MgCl₂ (na 40 reakcí v celkovém objemu 25µl).
• 1 zkumavka s 0,5 ml 25 mM MgCl₂.
• 1 zkumavka s 1,5 ml PCR H₂O.

Složení

• PPP Master Mix bez MgCl₂ se dodává 2x koncentrovaný: 150 mM Tris-HCl, pH 8,8 (při 25°C), 40 mM (NH₄)₂SO₄, 0,02% Tween 20, 400 µM dATP, 400 µM dCTP, 400 µM dGTP, 400 µM dTTP, 100 U/ml Taq DNA polymerázy, barvivo, stabilizátory a aditiva.

Skladování 

• Krátkodobě (dny) skladovat při teplotě 4°C ± 3°C.
• Dlouhodobě skladovat při teplotě -20°C ± 5°C. Materiál snáší opakované rozmrazování.

Kontrola kvality 

• Čistota Taq DNA polymerázy je ověřena metodou SDS PAGE, kdy enzym migruje jako jediný proužek o molekulové hmotnosti 94 kD. Preparát neobsahuje nukleázy.
• Každá šarže PPP Master Mixu bez MgCl₂ je testována na amplifikaci genu o jedné kopii v genomové DNA.